接下來(lái)，研究人員評(píng)估α-1,2- MAN是否有助于ICCA啟動(dòng)細(xì)胞的特性。腫瘤干細(xì)胞(Cancer stem cells, CSCs)主要存在于低糖或營(yíng)養(yǎng)儲(chǔ)存的微環(huán)境中。在1-2代低糖條件下，異位表達(dá)FLAG標(biāo)記的MAN1C1顯著減少α-1,2- man +CD133+細(xì)胞的球形成。極限稀釋分析被廣泛應(yīng)用于干細(xì)胞頻率的測(cè)定。
通過(guò)體外有限稀釋實(shí)驗(yàn)，研究人員發(fā)現(xiàn)MAN1C1過(guò)表達(dá)抑制了CD133+α-1,2- man +細(xì)胞的干細(xì)胞活性。MAN1C1的異位表達(dá)抑制了CD133+α-1,2- man +細(xì)胞的腫瘤啟動(dòng)能力，提高了腫瘤小鼠的存活率。總之，通過(guò)MAN1C1過(guò)表達(dá)抑制α-1,2- man修飾抑制了ICCA啟動(dòng)細(xì)胞的自我更新和腫瘤發(fā)生。
FIP200是哺乳動(dòng)物細(xì)胞自噬體形成所必需的。在營(yíng)養(yǎng)剝奪或缺氧的情況下，自噬維持tic的自我更新。α-1,2-MAN對(duì)ICCA啟動(dòng)細(xì)胞自噬的作用。LC3-I向LC3-II的轉(zhuǎn)化被用作自噬激活的指標(biāo)。MAN1C1過(guò)表達(dá)顯著降低CD133+α-1,2- man +細(xì)胞中LC3-II與LC3-I的比值。當(dāng)自噬被激活時(shí)，綠色熒光蛋白連接LC3 (GFP-LC3)集中在自噬液泡中形成點(diǎn)狀綠色熒光。MAN1C1的異位表達(dá)減少了GFP-LC3小點(diǎn)的形成?？偟膩?lái)說(shuō)，MAN1C1減少了ICCA啟動(dòng)細(xì)胞的自噬。
接下來(lái)，研究人員評(píng)估了FIP200在man1c1降低的自噬中的作用。FIP200的異位表達(dá)阻斷了MAN1C1對(duì)CD133+α-1,2- man +細(xì)胞自噬的負(fù)性作用，MAN1C1過(guò)表達(dá)對(duì)CD133+α-1,2- man +細(xì)胞自我更新的抑制作用被FIP200過(guò)表達(dá)部分挽救。過(guò)表達(dá)FIP200可逆轉(zhuǎn)MAN1C1對(duì)CD133+α 1,2- man +細(xì)胞的抑制作用。綜上所述，α 1,2- man通過(guò)上調(diào)FIP200的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)肝內(nèi)膽管癌起始細(xì)胞的自我更新和成瘤能力。
